تولید «پروتئین هماگلوتینین» در سلول حشره SF9

به گزارش خبرنگار گروه استان‌های خبرگزاری آنا، نیلوفر راشدی نخستین دانشجوی دکتری تخصصی رشته ژنتیک دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد شهریور جاری از رساله خود با عنوان «بیان هماگلوتینین ویروس آنفلوآنزا H۱N۱ در سلول حشره Sf۹ و ارزیابی پاسخ ایمنی همورال پس از فرمولاسیون در ادجوانت MF۵۹»  به‌صورت مجازی دفاع کرد.

پریسا محمدی‌نژاد و مرتضی تقی‌زاده به‌عنوان استادان راهنما و مهدی مهدوی و رضا جلالی‌راد استادان مشاور، استادان داور، علی‌محمد احدی، حسین تیموری و مریم پیمانی در جلسه دفاع این رساله دکتری به‌صورت مجازی حضور داشتند.

از این رساله یک مقاله در مجله Iranian journal of Allergy Asthma and immunology با (if   ۱/۱۰۹) چاپ شده است.

دانش‌آموخته دکتری تخصصی رشته ژنتیک دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد در تشریح چکیده‌ای از رساله دکتری خود بیان کرد: آنفلوآنزا يک بيماری بسيار مسری بوده كه سيستم تنفسی را درگير کرده و به‌طور فصلی در بيشتر بخش‌های دنيا، توسط ويروس آنفلوآنزا رخ می‌‌دهد. واكسيناسيون آنفلوآنزا راهی مؤثر برای كاهش علائم و مرگ و مير و بستری‌شدن افراد مبتلاست. 

وی هدف از اين مطالعه را استفاده از رده‌ سلولی حشره به‌عنوان پایه تولید برای بیان پروتئين نوترکیب هماگلوتينين و استفاده از اجوانت‌ها به‌منظور افزایش کارایی پروتئین مورد نظر در جلوگيری از ابتلا به آنفلوآنزای فصلی دانست.

راشدی با اشاره به مواد و روش‌های این تحقیق اظهار کرد: در این تحقیق قطعه ژنی هماگلوتینین از روی cDNA  حاصل از RNA ویروس H1N1 تکثیر یافت و با سیستم بیانی Bac-To-Bac شرکت اينويتروژن در وکتور pFast Bac HT A کلون  و در باکتری ‌ای.کلای سویه TOP10 ترانسفورم شد.

دانش‌آموخته دکتری تخصصی رشته ژنتیک دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد ادامه داد: پس از تأیید در باکتری اشریشیاکولی  DH10BBac به‌منظور تولید بکمید نوترکیب، ترانسفورم  و نتایج با PCR و رؤیت این قطعه در ژل آگارز یک درصد و کشت باکتری در محیط X-gal تأیید شد.

به گفته وی، طبق پروتکل شرکت اينويتروژن، وکتور به سلول حشره Sf9 ترانسفکت شد و تولید پروتئین هدف با روش SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ مورد بررسی قرار گرفت و بعد از خالص‌سازی به روش کروماتوگرافی فرمولاسیون در ادجوانت MF59 انجام شد.

راشدی گفت: بعد از این مرحله آنتی‌ژن حاصله که با ادجوانت‌ها در تعامل است به موش‌ها تزریق شد و میزان آنتی‌بادی تولیدی در بدن موش مورد سنجش قرار گرفت.

دانش‌آموخته دکتری تخصصی رشته ژنتیک درباره نتایج این تحقیق خاطرنشان کرد: بیان پروتئین هماگلوتینین با استفاده از تست‌های HA و وسترن بلات تأیید شد و سپس با تزریق به موش و با مقایسه با واکسن تجاری و split virus vaccine و در مقایسه با گروه کنترل توانست سطح مطلوبی از آنتی‌بادی را ایجاد و در آنتی سرم حاصله از تزریق در تست ممانعت از هماگلوتيناسيون و الایزا توانست سوش‌های H1N1 را خنثی کند.

وی افزود: در چالش با سوش حاد H1N1 نیز موش‌ها به‌خوبی زنده مانده و نتایج قابل مقایسه با گروه دریافت‌کننده واکسن تجاری بود. نتایج حاصله می‌تواند برتری واکسن تولیدشده در سلول حشره Sf9 را به واکسن تولیدشده در تخم مرغ نشان دهد.

انتهای پیام/4062/